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产品名称:MP Bio G418 geneticin遗传霉素

产品型号:0215878294

产品报价:120

产品特点:MP Bio G418 geneticin遗传霉素
常温运输。
粉末4℃避光保存,避免受潮,否则会降低抗生素活力。
规格:1g 5g

0215878294MP Bio G418 geneticin遗传霉素的详细资料:

MP Bio G418 geneticin遗传霉素

简单介绍:G418是一种对原核及真核细胞都具毒性的氨基糖苷类抗生素,它具有干扰蛋白合成的功能,可用来筛选表达G-418抗性基因(如:氨基糖苷3'磷酸转移酶[APH 3'])的培养细胞, 在分子遗传试验中常被用作抗性筛选。它通过抑制转座子Tn601,Tn5的基因对原核和真核等细胞产生毒素,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

G418 SulfateG418liu酸盐),也称作Geneticin(遗传霉素),是一种结构类似于庆大霉素B1Gentamycin B1)的氨基糖苷类抗生素,通过影响80S核糖体功能和阻断延伸步骤来干扰蛋白合成,对原核和真核等细胞都有毒性 ,包括细菌、酵母、高等植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。其抗性基因(主要为neo基因)位于转座子Tn601903)或Tn5(来源于细菌),但是可以在真核细胞中表达。通过基因重组技术将这些抗性基因导入细胞,使其获得对G418的耐药性,从而用来筛选和维持培养携带抗性基因的原核或者真核细胞。

MP Bio G418 geneticin遗传霉素

哺乳动物细胞中,当抗性基因neo被整合进真核细胞基因组后 ,使其编码表达氨基糖苷磷酸转移酶amino-glycoside 3’-phosphotransferaseAPH(3)II)。此酶通过共价修饰G418的氨基或羟基功能,抑制抗生素-核糖体间的相互作用,从而使得抗生素失活。这一特性赋予细胞产生抗性。稳转细胞株筛选实验,需要建立杀灭曲线(剂量反应曲线)确定杀死无抗性细胞的zui低有效浓度。

植物细胞中,通过转染携带nptII基因的抗性质粒孵育其抗性。nptII基因也能编码表达氨基糖苷磷酸转移酶,这个酶使得多种抗生素丧失活性,包括G418,卡那霉素和巴龙霉素。

 

使用方法

1.       G418储存液的配制(50mg/ml,活性浓度

  1. 活力单位的换算

根据此公式进行换算:1000/A0)×A1=A2,其中A0G418的活力值(Potency),因批次而异。可见批次对应的质检报告,或者瓶子上的标签。A1是想配制的活性G418浓度。A2是实际称重的粉末与体积比浓度。

比如若所用批次的G418 活力值为:750 µg/mg,要配制50mg/mlG418活性浓度,则实际要配制的粉末浓度为1000/750×50 mg/ml=66.33 mg/ml

如果配制10mlG418储存液(活性浓度,50 mg/ml),则需要称取663.3mg粉末。

  1. 除菌和保存

根据上述换算得到的实际粉末称重量,加入10 ml无菌去离子水内使其完全溶解。

先用5ml无菌去离子水预湿润0.22μm针头式过滤器,除尽水。之后使用此滤器过滤,除菌后分装成单次使用的小量(如1ml)放到-20冻存,1年稳定。

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